Doktoritöö pealkiri eesti keeles: "Parendatud meetodiarenduse strateegia derivatiseerimise LC/ESI/MS jaoks."
Juhendaja: dotsent Koit Herodes
Oponent: Prof. Jonas Bergquist, Dr Med Sci, PhD, Uppsala University, Rootsi
Lühikokkuvõte:
Aminohapete tundlikuks analüüsiks kasutatakse derivatiseerimise vedelikkromatograafia-elektropihustus-ionisatsioon-massispektromeetriat (LC/ESI/MS). Antud töö raames kontrolliti kõikide metoodika etappide (proovi ettevalmistus, derivatiseerimine, kromatograafia, massianalüüs) sobivust aminohapete analüüsiks LC-ESI-MSiga.
Töötati välja metoodikad viie derivatiseeriva reagendi kasutamiseks: Fmoc-Cl, DNS, Deemm, TAHS ning laboris disainitud ja sünteesitud uudse fosfaseenil põhineva reagendi (FOSF) jaoks. Väljatöötatud metoodikate võrdlemine näitas, parimat tundlikkust pakuvad uudsed reagendid TAHS ja FOSF, kuid võrreldes klassikaliste reagentidega on neil tunduvalt kehvem kromatograafiline lahutus, mis on oluline eelkõige keeruliste maatriksite analüüsi korral. Kokkuvõtvalt on Deemm parim derivatiseeriv reagent pakkudes kompromissi hea tundlikkuse ja kromatograafilise lahutuse vahel. Tehti ka kindlaks, et kõige paremini sobivaks prooviettevalmistuse meetodiks on tahkefaasiekstraktsioon.
Käesolevas töös uuriti esmakorselt derivatiseerimisprotseduuride sobivust LC/ESI/MS analüüsiga. Tulemused näitasid, et derivatiseeriva segu puhvri valik mõjutab oluliselt signaali stabiilsust ja intensiivsust. Olulisemad mõjud olid seotud boraatpuhvriga. Samuti tehti töö käigus kindlaks reagentidele kõige paremini sobivad kromatograafilised eluendid ja uuriti erinevaid võimalusi tundlikkuse parandamiseks.
Lisaks eelmainitule teostati ka ionisatsiooni efektiivuste mõõtmisi logIE skaala täiendamiseks ning uuriti põhjalikumalt MS optimeerimist, mis andsid olulist lisainformatsiooni, et meetodiarendus oleks veelgi täielikum ja süstemaatilisem. Praktilised rakendused näitasid derivatiseerimise LC/ESI/MS analüüsi head sobivust tundlikuks aminohapete sisalduse määramiseks meeproovidest ning selenoaminohapete määramiseks vereseerumist ja toidust (sibulast).
Töö tulemusena näidati, et derivatiseerimise LC/ESI/MS meetodiarenduseks on vaja kaasata uusi aspekte, et võimaldada veelgi madalamaid määramispiire. Antud töö koondab kokku olulisemad aspektid ning pakub seega välja parendatud meetodiarenduse strateegia derivatiseerimise LC/ESI/MS jaoks.
Märksõnad: aminohapped, LC/ESI/MS, derivatiseerimine, metoodika arendus.